登录
首页 >> 中医基础常识 >> 杂谈

成纤维细胞生长因子信号分子的结构和功能

医案日记 2023-06-21 10:51:16

作者:姜笃银

早期研究使用的成纤维细胞生长因子(FGFs)主要来自牛脑和脑垂体的提取液,是大约150个氨基酸结构的酸性或碱性成纤维细胞生长因子(aFGF:FGF1或bFGF:FGF2)。其后分离的 癌基因产物的细胞增殖因子与上述FGFs结构类似,也被分类在FGFs家族,并依次命名为FGF3~9〔1〕。目前已发现23种 FGFs。现主要就多能FGFs结构和相关功能机制 的研究进展进行综述。

1发现和鉴定新的FGFs结构

FGFs作为细胞间信号分子在胚胎发生和分化过程中起重要作用。FGFs 是由约150~200氨基酸 组成的多肽,相互之间的氨基酸序列有20%~50%是相同的〔2,3〕。其中心区域有大约120个氨基酸序列存在高度的同源性(30%~70%)。利用该区域的同源性,以人、小鼠或大鼠 cDNA 和基因组DNA为模板、采用同源序列PCR法进行新 FGFs基因检测。当然,还可以采用T7噬菌体cDNA显示法鉴定新FGFs。FGFs受体(FGFRs)是典型的膜结合酪氨 酸激酶型受体。将FGFRs的胞外结构域在杆状病毒群(baculovirus) 表达株表达,制成重组的细胞外结构域(可溶性 FGF受体)。进而利用可溶性 FGFRs与配体 结合的特性,通过T7噬菌体 cDNA显示法对互补cDNA 文库进行筛选。

通过同源序列PCR法,已经发现了6种新的FGFs基因( FGF10、FGF16、FGF17、FGF18、FGF20、FG F21)〔4〕。虽然T7噬菌体 cDNA显示法能获得较多的阳性克隆,但不能确认 是新发 现的 FGFs。随着人类基因组结构的解析及其DNA 数据库被公开,通过基因检索进而又发现3种新的FGFs基因(FGF19、FGF22、FGF23)〔5,6〕,并发现FGF-22mRNA 选择性表达于皮肤毛囊的内毛根鞘〔7〕。加上在探索视网膜特异性 表达基因的过程中所发现的4种新的FGFs基因(即FGF11、FGF12、FGF13和FGF14)〔1〕,以及McWhirt er等〔8〕在探索嵌合体同源结构域癌蛋白(chimeric homeodomain oncoprotein)E2A-Pbx1下游目标过程中发现的FGF15,迄今共鉴定出23种人或鼠FGFs。但是 人FGF15和小鼠FGF19尚未被证实。人FGF19与小鼠FGF15显示很高的同源性(约50%),且这两种基因都跟FGF3、FGF4基因的染色体邻接〔3〕,由此推断人FGF19是小鼠FGF15的相同体。由于人与小 鼠其他FGFs结构之间的同源性达90%以上,因而除非FGF15和 FGF19在进化过程中意外地发 生大的变异,否则两者将伴随着进化过程而逐渐消失。

2FGFs家族成员和基因定位

在人类的FGFs中,能细分出FGF7、FGF10、FGF22和FGF9、FGF16、FGF20等许多亚科(subfamily)。FGFs 亚科与各染色体定位之 间无明显的相关性,人类FGFs基因多数散在分布于全基因组中。但也有一些FGFs基因在基因 组 上形成群落,如FGF3、FGF4和FGF19位于染色体11q13,FGF6、FGF23位于染色体13p13,而FG F17、FGF20则位于染色体8p21-p22相互邻接位置上。由此推断FGFs基因家 族是在进化、复制和易位等复杂过程中形成的〔1〕。人类FGFs基因的翻译区域多数 由3个基因构成相似的外显子(exon)构成。但在FGF11~14的翻译区域是由5个外显子构成的 〔3〕,FGFs 基因翻译区域的大小约5~100kb。此外,部分FGFs 可通过机 制不清的选择性剪接(alternative splicing)形成FGFs亚型。

FGFs可以分为几个亚组,FGF10和 FGF7同属于角朊细胞生长因子(KGF)组。除了FGF15外,以22种人类FGFs氨基酸序列的中心区 域为 基础制成以上进化系统树(FGF15使用小鼠的氨基酸序列)。树中横线显示氨基酸序列偏离程 度,箭头所指为人类FGFs在染色体上的位置〔3,6〕(注:人类 FGF15基因和FGF16基因位置未 确定)。

多数FGFs(FGF3~8、10、15、17~19、21~23)的N末端具有典型的信号序列分泌蛋白。然而F GF19、FGF16和FGF20虽然没有明确的信号序列却能高效地分泌到细胞外〔3〕。FGF1和FGF2也缺乏信号序列和正常的分泌途径,却能出现在胞外基质,推测两者可能来自受伤的 细胞,或者通过与内质网-高尔基体通路不同的细胞脱颗粒机制进行释放。此外,FGF11~14没有信号序列,认为这些FGFs被储留在胞内〔1〕。

FGFs不仅存在于脊椎动物体内,也存在于无脊椎动物体内。通过基因组的解读,在果蝇和C.e legans分别找到1种FGF(branchless)〔1〕和2种FGFs(egl-17和let-756)〔9〕,斑马鱼(zebrafish)有4种FGFs(FGF3、8、17、18),爪蟾(xenopus)则有6种FGFs〔(FGF(i)、(ii)和FGF3、8、9、20〕,鸡有7种FGFs( FGF2、4、8、12、14、18、19),然而在E.coli和S.cerevisiae等单细胞生物中未检到 FGFs,显示FGFs家族成员在向脊椎动物进化的过程中呈现增加的趋势〔3〕。

图1是FGFs家族进化树及其基因定位〔1,3,6〕。FGFs可以分为几个亚组,FGF10和F GF7同属于角朊细胞生长因子(KGF)组。除FGF15外,以22种人 FGFs 氨基酸序列的中心区域 为 基础制成该进化系统树(FGF15使用小鼠的氨基酸序列)。横线显示氨基酸序列偏离程度。箭头所指为人FGFs在染色体上的位置〔3,6〕(注:人FGF15基因和FGF16基因位置 未确定)。

3FGFs基因敲除(KO)与功能解析

目前已经报告11种 FGFs KO小鼠,其表型多种多样(表1)。FGF1和 FGF2因广泛表达于胚胎 和成体组织器官,并因参与组织器官修复而倍受关注〔10〕,但在其基因敲除小鼠身上不是完全正常就是仅有轻微异常。此前曾推测,FGF1和 FGF2KO小鼠几乎不发生异常 的原因可能与两者结构和生物活性类似、可相互弥补对方的功能缺失有关,然而在FGF1/FG F2双KO小鼠依旧显示轻微的异常〔11〕。因此,需继续加强FGF1和FGF2的生理功能 的研究。此外,FGF4,FGF8,FGF9和 FGF10KO小鼠会导致胚胎死亡或出生即刻死亡。通过这些 FGFs KO 小鼠的表型的解析,将逐渐明确FGFs作为形态发生因子的重要性〔3〕。在所有FGFs中,FGF10是广泛作用于上皮细胞(无论在外胚层上皮还是在内皮层上皮)重要的间质调控因子,在胚胎多种组织或器官发生中起着不可或缺的作用(表2)。FGF10K O 小鼠不仅不能形成四肢、肺、甲状腺、胸腺、垂体前叶和下颌下腺,还导致牙齿,肾脏,胰 腺等器官的发育不全〔1〕。已知FGFR2b的配体有FGF1、FGF7、FGF10,但FGF1和FGF7KO小鼠表型正常或只有轻微异常(表1),而FGFR2b KO小鼠〔12〕表型与FGF10KO 小鼠表型又非常相似(表2),从而推断FGF10是FGFR2b的主要配体,充当上皮-间质相互作用的重要信号,是多种器官发育必需的形态发生因子。

4FGFs作用机制及其影响因素

4.1FGFs的信号通路:FGFs与存在于细胞表面的FGFRs结合,将信号传递到胞内。FGFRs有4种基因型(FGFR1~4),同是一种跨膜蛋白质,主要由3个部分组成:即胞外段、跨膜区和胞内段。胞外段为配 体结合区,包括2个或3个免疫球蛋白样功能区。根据FGFRs选择性拼接的差异,目前已知存在7种 受体 蛋白的亚型结构〔15〕。如FGFR1有FGFR1b,1c,2b,2c,3b,3c,47种〔2〕,各自均有不同的配体特异性。同样FGFR2也可产生FGFR2-Ⅲb和FGFR2-Ⅲc两种受体亚型。FGFR2-Ⅲb主要在上皮细胞中表达,FGFR2-Ⅲ c主要在间质细胞中表达。间质细胞表达的FGF7和FGF10能特异性地激活FGFR2-Ⅲb,而FGF2、FGF4、FGF6、FGF8和FGF9则特异性激活FGFR2-Ⅲc,这种结合的 特异性与细胞膜环境和硫酸乙酰肝素有关〔16〕。其中,FGF10与FGFR2Ⅲb有较高的 亲和力,是特异性配体。当FGFR2胞外段发生点突变(S252W)时,促使FGF7和FGF10激活FGF R2-Ⅲc和FGF2、FGF6、FGF9激活FGFR2-Ⅲb,导致表达这些配体的 细胞自分泌信号激活。

与多数生长因子受体一样,FGFRs都是酪氨酸激酶型受体,在与配体结合后发生二聚体化,从而激活酪氨酸激酶,在激活Shc/Frs-Raf/MAPKKK-MAPKK-MAPK通路的基础上,通过大量释放磷脂酶C(PLC)、蛋白激酶C(PKC)、磷脂酰肌醇3-激酶系统(IP3K)和Ca2+,向细胞内传递信号〔2,17〕。目 前,对细胞内 FGF-FGFR系统下游其他信号的传递作用仍所知甚少,有待研究揭示。

4.2胞外基质对FGFs的调节作用:FGFs与肝素和硫酸肝素等酸性多糖结合〔13〕。这些酸性多糖不仅能提高FGFs的热稳 定性和对蛋白酶解(proteolysis)的抵抗性,也能起到浓集和释放FGFs等作用。最近研究显示,FGFs与酸性多糖结合可提高与FGFRs的亲和力和稳定性。而且,通过结构研究,已经 明确了 FGFs 与FGFRs 和酸性多糖的结合部位〔18〕。目前已知23种FGFs均分别作用 于硫酸乙酰肝素(HSPG)链的不同特异性部位,并通过选择性形成FGFRs-FGFs-HS(硫酸乙酰肝素)复合体以调控生长因子浓度及其信号传递,由此证实酸性多糖 是FGFs 信号的必需因子。

4.3FGFs拮抗剂的调节:属于Wnt、Bmp和Hedgehog家族等分泌性信号分子存在分泌性拮抗剂,通过信号和拮抗剂的双 调节(dual regulation)作用精细而巧妙地控制各自的信号系统〔19〕。最早被确 认的FGFs拮抗剂是来自果蝇的sprouty(spry)。起初曾认为spry是一种分泌性信号,其后的 研究证实spry是一种与细胞膜内侧结合的胞内蛋白质,spry 通过阻碍Ras信号传递来阻断FG Fs 信号〔20〕。随后,spry也在脊椎动物得到确认。研究显示,spry表达受FGFs 信号的诱导,如肢芽形成区域spry过表达将阻碍肢芽形成〔21〕。

5结语

庞大的FGFs家族成员是对多种细胞显示多样生理和(或)药理作用的多能信号分子〔2〕。随着FGFs基因组工程的完成和蛋白组工程(结构、功能和作用机制)的研究深入,作为细胞增殖因子、血管形成因子、神经营养因子、形态发生因子、组织修复-再生因 子的FGFs,有望在发育学、生理学和临床药理学方面作出贡献。

参考文献

〔1〕Itoh N.FGFs as multifunctional signaling molecules:diversity of st ructure and function〔J〕.Seikagaku,2001,73(7):525-535.

〔2〕Szebenyi G,Fallon J F.Fibroblast growth factors as multifunctional signalin g factors〔J〕.Int Rev Cytol,1999,185:45-106.

〔3〕Ornitz D M,Itoh N.Fibroblast growth factors〔J〕.Genome Biol,2001,2(3):(Review)3005.1-3005.12.

〔4〕Ohmachi S,Watanabe Y,Mikami T,et al.FGF-20,a novel neurotrophic factor,preferentially expressed in the substantia nigra p ars compacta of rat brain〔J〕.Biochem Biophys Res Commun,2000,277(2):355-360.

〔5〕Nakatake Y,Hoshikawa M,Asaki T,et al.Identification of a novel fi broblast growth factor,FGF-22,preferentially expressed in the inner r oot sheath of the hair follicle〔J〕.Biochim Biophys Acta,2001,1517(3):460-463.

〔6〕Yamashita T,Yoshioka M,Itoh N.Identification of a novel fibroblast growth factor,FGF-23,preferentially expressed in the ventrolateral thala mic n ucleus of the brain〔J〕.Biochem Biophys Res Commun,2000,277(2):494-498.

〔7〕Nakatake Y,Hoshikawa M,Asaki T,et al.Identification of a novel fi broblast growth factor,FGF-22,preferentially expressed in the inner r oot sheath of the hair follicle〔J〕.Biochim Biophys Acta,2001,1517(3):460-463.

〔8〕McWhirter J R,Goulding M,Weiner J A,et al.A novel fibroblast growth fac tor gene expressed in the developing nervous system is a downstream target of th e chimeric homeodomain oncoprotein E2A-Pbx1.Development,1997,124(17):3221-3232.

〔9〕Roubin R,Naert K,Popovici C,et al.Let-756,a C.elegans fgf essential for worm development〔J〕.Onco gene,1999,18(48):6741-6747.

〔10〕付小兵,孙同柱,孙晓庆,等.EGF和bFGF在大鼠不同发育阶段肠道定位 和表达特 征的比较研究〔J〕.中国危重病急救医学,2001,13(7):407-409.

〔11〕Miller D L,Ortega S,Bashayan O,et al.Compensation by fibroblast growth factor1(FGF1)does not account for the mild phenotypi c defects observed in FGF2null mice〔J〕.Mol Cell Biol,2000,20(6):2260-2268.

〔12〕De Moerlooze L,Spencer-Dene B,Revest J,et al.An important role for the Ⅲb isoform of fibroblast growth factor r eceptor2(FGFR2)in mesenchymal-epithelial signalling during mouse organogenesis〔J〕.Development,2000,127(3):483-492.

〔13〕Ohuchi H,Hori Y,Yamasaki M,et al.FGF10acts as a major ligand for FGF receptor2Ⅲb in mouse multi-organ developme nt〔J〕.Biochem Biophys Res Commun,2000,277(3):643-649.

〔14〕Sakaue H,Konishi M,Ogawa W,et al.Requirement of fibroblast growth factor10in development of w hite adipose tissue〔J〕.Genes Dev,2002,16(8):908-912.

〔15〕McKeehan W L,Wang F,Kan M.The heparan sulfate-fibroblast growt h factor family:diversity of structure and function〔J〕.Prog Nucleic Acid Res Mo l Biol,1998,59:135-176.

〔16〕Uematsu F,Kan M,Wang F,et al.Ligand binding properties of binary complexes of heparin and immunoglobulin-like mod ules of FGF receptor2〔J〕.Biochem Biophys Res Commun,2000,272(3):830-836.

〔17〕Klint P,Claesson-Welsh L.Signal transduction by fibroblast gro wth factor receptors〔J〕.Front Biosci,1999,4:D165-177.

〔18〕Schlessinger J,Plotnikov A N,Ibrahimi O A,et al.Crystal structure of a ternary FGF-FGFR-heparin complex reveals a dual role for heparin in FGFR binding and dimerizati on〔J〕.Mol Cell,2000,6(3):743-750.

〔19〕Freeman M.Feedback control of intercellular signalling in development〔J 〕.Nature,2000,408(6810):313-319.

〔20〕Casci T,Vinos J,Freeman M.Sprouty,an intracellular inhibitor of Ras sign aling〔J〕.Cell,1999,96(5):655-665.

〔21〕Minowada G,Jarvis L A,Chi C L,et al.Vertebrate Sprouty genes are indu ced by FGF signaling and can cause chondrodys plasia when overexpressed〔J〕.Development,1999,126(20):4465-4475.

作者简介:姜笃银(1963-),男(汉族),江苏省泰州市人,医学博士后,副主任医 师,主要从事创伤修复失控机制和临床应用研究,Tel:13961015600,13683589368;E-mail:jdybs @163.com。摘自:急救快车(.00026000W03.)

本文地址:http://www.dadaojiayuan.com/zhongyizatan/79712.html.

声明: 我们致力于保护作者版权,注重分享,被刊用文章因无法核实真实出处,未能及时与作者取得联系,或有版权异议的,请联系管理员,我们会立即处理,本站部分文字与图片资源来自于网络,转载是出于传递更多信息之目的,若有来源标注错误或侵犯了您的合法权益,请立即通知我们(管理员邮箱:602607956@qq.com),情况属实,我们会第一时间予以删除,并同时向您表示歉意,谢谢!

上一篇:

下一篇:

相关文章