荧光检查能查出来什么,荧光检查注意点

提起荧光检查可能很多人并不是很清楚这是一种什么样的检查，其实荧光检查在妇科检查方面应用还是很多的。但是很多人不清楚的问题就是荧光检查到底能够检查什么出来，那么本文就针对这个问题来给大家做个具体的介绍和说明。

首先大家需要明确的一个问题就是，荧光检查就是妇科生殖系统疾病中所使用的一种检查方法，比起肉眼观察的方法，荧光检查法不仅更加客观、灵敏度更高，而且可以提高检查的准确性，所以日常使用是很多的。所谓的荧光检查就是让荧光物质进入到生殖系统的静脉中去。进行造影。其实荧光造影在妇科检查上的应用主要是用来检查宫颈癌和一些瘤变病症的早期筛查。不仅如此，荧光检查还可以用来进行细菌、病毒、支原体等的诊断。

如果患者担心自己患上了红斑狼疮、斑疹样皮炎的话，也是可以采用荧光造影的方法来检查一下的。荧光检查的日常使用很广泛，但是在使用此种检查方法的时候，也是有一些问题需要大家注意的。首先大家需要了解的就是在做检查之前，要先做好病人的心理护理，向病人说明这个检查的过程，解除病人的思想顾虑，得到病人的配合。每次试验的时候应该设阳性和隐性来对照，而且标本是需要及时检测的，在保存方面要避光保存。

通过上文的介绍，相信大家对荧光检查到底可以用来检查什么的问题已经有了一个大概的了解。其实荧光检查在日常中的使用还是比较多的，但是在使用方面大家也是有一些问题需要注意的，首先医生要给患者做好心里建设，而且一定要注意保证荧光抗体的质量。

荧光显微镜的使用需要注意哪些问题？何谓直接荧光与间接荧光

（1）严格按照荧光显微镜厂家说明书要求进行操作，不要随意改变程序。
（2） 观察对象必须是可自发荧光或已被荧光染料染色的标本。
（3）应在暗室中进行检查。进入暗室后，接上电源，点燃超高压汞灯5～15min，待光源发出强光稳定后，眼睛完全适应暗室，再开始观察标本。
（4）载玻片、盖玻片及镜油应不含自发荧光杂质，载玻片的厚度应在0.8～1.2mm之间，太厚可吸收较多的光，并且不能使激发光在标本平面上聚焦。载玻片必须光洁，厚度均匀，无油渍或划痕。盖玻片厚度应在0.17mm左右。
（5）防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜。
（6）选用效果最好的滤光片组。
（7）检查时间每次以1～2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射3～5min后，荧光也明显减弱；所以，最多不得超过2～3h。 （8）荧光标本一般不能长久保存，若持续长时间照射（尤其是紫外线）易很快褪色。因此，如有条件则应先照相存档，再仔细观察标本。
（9）荧光显微镜光源寿命有限，启动高压汞灯后，不得在15min内将其关闭，一经关闭，必须待汞灯冷却后方可再开启。严禁频繁开闭，否则，会大大降低汞灯的寿命。标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时，须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。
（10）标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发。
（11）若暂不观察标本时，可拉过阻光光帘阻挡光线。这样，既可避免对标本不必要的长时间照射，又减少了开闭汞灯的频率和次数。
（12）荧光亮度的判断标准：一般分为四级，即“一”—无或可见微弱荧光。“+”—仅能见明确可见的荧光。“++”—可见有明亮的荧光。“+++”—可见耀眼的荧光。
（13）较长时间观察荧光标本时，一定要戴能阻挡紫外光的护目镜，加强对眼睛的保护。在未加入阻断滤光片前不要用眼直接观察，否则会损伤眼睛。

(14) 激发光长时间的照射，会发生荧光的衰减和淬灭现象，因此尽可能缩短观察时间，暂时不观察时，应用挡板遮盖激发光。
(15) 作油镜观察时，应用“无荧光油”。
(16) 荧光几乎都较弱，应在较暗的室内进行。

荧光显微镜的注意事项

（1）严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序。
（2）应在暗室中进行检查。进入暗室后，接上电源，点燃超高压汞灯5～15min，待光源发出强光稳定后，眼睛完全适应暗室，再开始观察标本。
（3）防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜。
（4）检查时间每次以1～2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射3～5min后，荧光也明显减弱；所以，最多不得超过2～3h。
（5）荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时，须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。
（6）标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发。长时间的激发光照射标本，会使得荧光衰减和消失现象，故应尽可能缩短照射时间。暂时不观察时可用挡光板遮盖激发光。
（7）标本观察时候应采用无荧光油，应避免眼睛直视紫外光源。
（8）电源应安装稳压器，电压不稳会降低荧光灯的寿命。
荧光显微镜与光学显微镜的区别
荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：
1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上；
2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜；
3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人目。
荧光显微镜也是光学显微镜的一种，主要的区别是二者的激发波长不同。由此决定了荧光显微镜与普通光学显微镜结构和使用方法上的不同。
荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。

免疫荧光的方法有什么注意环节

1、冰冻切片制备：建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。选用干净锋利的刀片、组织一定要冷冻适度等，防止裂片和脱片严重。

2、组织切片固定：切好片风干后立即用冰丙酮等固定液进行固定?5-10?min，尤其要较长时间保存的白片，一定要及时固定和适当保存。

3、血清封闭：为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合，需要在一抗孵育前先用血清（与二抗来源一致）封闭，减弱背景着色。血清封闭的时间是可以调整的，一般?10-30?min。

4、一抗孵育条件：在免疫组化反应中最重要，包括孵育时间和抗体浓度。一抗孵育温度有几种：4℃?、室温、37℃?，其中?4℃?效果最佳；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般?37℃?1-2?h，而?4℃?过宿和从冰箱拿出后?37℃?复温?45?min。具体条件还要摸索。

5、二抗孵育条件：二抗一般室温或?37℃?立即观察，若将标本放在聚乙烯塑料袋中?4℃?30?min-1h，具体时间需要摸索，而浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度，切记要避光反应。但在免疫荧光中我们一般先把二抗浓度和孵育时间先定下，然后去摸索一抗浓度和孵育时间。最后，荧光素标记的二抗随着保存时间的延长，可能后有大量的游离荧光素残留，需要注意配制时小包装和并进行适当的离心。

6、复染：目的是形成细胞轮廓，从而更好地对目标蛋白进行定位。一般常用?DAPI?复染。

7、封片：为了长期保存，我们一般用缓冲甘油等封片，此外还有专门的抗荧光萃灭封片液。避免产生气泡，方法是直接在载玻片组织上滴一滴封片液，然后一手拿住盖片某一拐角，而另一手拿对面的那个拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接触到液体时为止；当发现液体接触面在不断弥散时，则可以缓慢降低另一拐角，这样一般不会产生气泡。

8、切片清洗：为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色，所以适当地加强清洗（延长时间和增多次数）尤为重要，我一般在一抗孵育前的清洗是?3?min*3?次，而一抗孵育后的清洗均为?5?次*5?min。注意：单独冲洗，防止交叉反应造成污染。温柔冲洗，防止切片的脱落。我喜欢用浸洗方式；冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质。PBS?的?pH?和离子强度的使用和要求。这方面我有惨痛教训，当时我买的抗体稀释液偏酸，结果背景一片黄（未见特异性染色），建议?pH?在?7.4-7.6?浓度是?0.01?M。（中性及弱碱性条件（pH7-8）有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解）

9、拍照：有条件的话最好立即拍照，若不能及时拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和湿度。使用荧光显微镜注意严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序；应在暗室中进行检查；防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜；检查时间每次以1~2?h?为宜，超过?90?min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射?3~5?min?后，荧光也明显减弱或褪色；激发光长时间的照射，会发生荧光的衰减和淬灭现象；所以最多不得超过?2~3?h；荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再启用时，须待灯光充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。关闭汞灯至少在开启?15-30?分钟后；标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中?4℃?保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发；使用的玻片等载体，都必须厚度均匀，无明显的自发荧光，如果使用油镜，还必须保证镜油为无荧光镜油；电源最好装稳压器，否则电压不稳不仅会降低汞灯的寿命，也会影响镜检的效果。

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