CNS高产学者Cell：线粒体代谢物测量新法

2016年09月05日讯 最近，Whitehead研究所的科学家们开发出一种方法，可快速分离和系统地测量线粒体（被称为细胞的“动力室”）内的代谢物浓度。之前尝试这种测量，得到的结果不可靠，要么分离线粒体的时间太长，要么来自其他细胞成分的内容物污染了线粒体代谢物。

David Sabatini称：“这种新方法的优点在于，它将速度和特异性结合起来。我们对在体内和其他细胞器（如溶酶体）中应用这一流程而感到很兴奋。”

通过精确控制的化学反应，线粒体以ATP的形式产生能量，并在细胞内稳态中发挥着重要的作用。线粒体功能障碍存在于一些疾病中，包括帕金森氏病、心血管疾病和线粒体疾病。到现在为止，探究这些重要细胞器的内部代谢运作，一直是具有挑战性的和不准确的。

分析线粒体代谢产物的常规方法，涉及使用几轮的离心来纯化线粒体，这个过程需要进行一个多小时来完成。据David Sabatini实验室的研究生Walter Chen介绍，在研究代谢产物时，时间是一个重要的问题。

Chen说：“即使你使样品保持在4摄氏度或0摄氏度，以减缓任何反应，你得到的线粒体代谢曲线仍然逐渐失真，因为酶仍然在起作用，所以转运蛋白也在起作用。随着时间的推移，线粒体在细胞外变得越来越不快乐了。”

另一种常用来分析线粒体代谢产物的方法，依赖于简化的离心分离，来分离线粒体。虽然更快，但是这个流程也带来了非线粒体物质和其他细胞器，因此由于来自其他线粒体的代谢产物，使得真正的线粒体信号失真。

为了减少分离线粒体需要的时间，同时增加代谢物分析的精度，Chen采取了一种完全不同的方法--快速纯化。他将线粒体的外部涂上表位标签，并添加了覆盖有标签特异性抗体的的微珠。通过锁定这些标签，抗体将线粒体连接到微珠上，从而使Chen能够容易地分离线粒体，打破线粒体，并在10分钟内停止所有的酶活性。根据他的分析，这种更快的方法所产生的结果，能够更好地反映一个活细胞内实际的线粒体代谢水平。

Chen指出：“根据目前为止我们的数据显示，用这种方法分析线粒体，绝对会带给你更大的分辨率，超过传统方法分析整个细胞所获得的分辨率。我认为这将是相当强大的，这正是我最兴奋的地方。我已经看到，这可能给人们指出了新的和有趣的方向。”

Chen说，该方法是非常灵活的，可以适用于分析其他细胞器的代谢产物，并能够把受线粒体功能障碍影响的细胞（如受帕金森氏病损坏的神经元）内的线粒体，与似乎不受疾病影响的正常细胞或其他类型的细胞进行比较。

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